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高效液相色譜的常見問題

點擊次數(shù):1775  更新時間:2020-09-02
  高效液相色譜的常見問題有:
 
  1、渦流擴散
 
  流動相碰到較大的固體顆粒,就像流水碰到石頭一樣產(chǎn)生渦流。如果柱裝填得不均勻,有的部分松散或有細溝,則流動相的速度就快;有的部位結(jié)塊或裝直緊密則流就慢,多條流路有快有慢,就使區(qū)帶變寬。因此,固相載體的顆粒要小而均勻,裝柱要松緊均一,這樣渦流擴散小,柱效率高。
 
  2、分子擴散
 
  分子擴散就是物質(zhì)分子由濃度高的區(qū)域向濃度低的區(qū)域運動,也稱縱向分子擴散。要減少分子擴散就要采用小而均勻的固相顆粒裝柱。同時在操作時,如果流速太慢,被分離物質(zhì)停留時間長,則擴散嚴重。
 
  3、質(zhì)量轉(zhuǎn)移
 
  被分離物質(zhì)要在流動相與固定相中平衡,這樣才能形成較窄的區(qū)帶。在液相色譜中,溶質(zhì)分子要在兩個液相之間進行分配,或在固相上被吸附和解吸附均需要一定的時間。當流速快時,轉(zhuǎn)移速度慢,來不及達到平衡動相就向前移,這各物質(zhì)的非平衡移動,使區(qū)帶變寬。
 
  4、動相流速
 
  當流速太低時,分子擴散嚴重,特別是在氣相色譜中尤為突出。如將理論塔板高度對流速作圖,理論塔板高度隨流速增加而急速下降,當達到低值時,流速再加大則質(zhì)量轉(zhuǎn)移起主要作用,理論塔板高度又加大。在高效液相色譜中,流速稍快影響不大,但在凝膠過濾色譜中,因為物質(zhì)要滲透到凝膠內(nèi)部,所以質(zhì)量轉(zhuǎn)移影響大,流速咖大會降低柱效率。
 
  5、固定相顆粒大小
 
  定相顆粒越小柱效率越高,對流動相流動的阻力越大,需要加大壓力才能使它流動。
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